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T淋巴細胞亞群CD23 ELISA 試劑盒

簡要描述:T淋巴細胞亞群CD23 ELISA 試劑盒 T lymphocyte subsets CD23 Assay Kit!本公司長期經營代理試劑盒,價格實惠,質量保證,價格請咨詢在線人員。

  • 產品型號:CD23
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2018-06-28
  • 訪  問  量:299

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T淋巴細胞亞群CD23 ELISA 試劑盒

⒈ 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

⒉ 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

⑴ 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

⑵ 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

⑶ 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

⑷ 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是當前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

T淋巴細胞亞群CD23 ELISA 試劑盒

間接法

間接法常用于檢測抗體,一般的操作步驟為:

  1. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余的抗原。

  2. 加入待測檢體,檢體中若含有待測的一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結。

  3. 洗去多余待測檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測的一次抗體鍵結。

  4. 洗去多余未鍵結二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。

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