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脂聯素(ADP)ELISA 試劑盒

簡要描述:脂聯素(ADP)ELISA 試劑盒 Adiponectin Assay Kit!本公司長期經營代理試劑盒,價格實惠,質量保證,價格請咨詢在線人員。

  • 產品型號:ADP
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2018-07-02
  • 訪  問  量:292

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脂聯素(ADP)ELISA 試劑盒

需要而未提供的試劑和器材

1.   37℃恒溫箱。

2.   標準規格酶標儀。

3.   精密移液器及一次性吸頭

4.   蒸餾水,

5.   一次性試管

6.   吸水紙

脂聯素(ADP)ELISA 試劑盒

雙抗體夾心法

雙抗體夾心法是檢測抗原常用的方法,操作步驟如下:

雙抗體夾心法雙抗體夾心法

一、將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結合的抗體及雜質。

二、加受檢標本:使之與固相抗體接觸反應一段時間,讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合,形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。

三、加酶標抗體:使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。

四、加底物:夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。

根據同樣原理,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物,即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步法檢測。

在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象,此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測讀,所得結果將低于實際的含量,這種現象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。

假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型,顯然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,這也是用單抗作夾心法應注意的問題。

雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結合,表現出假陽性反應。采用F(ab')或Fab片段作酶結合物的試劑,由于去除了Fc段,從而可消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項考核指標(參見6.2)。

夾心法

夾心法常用于檢測大分子抗原,一般的操作步驟為:

  1. 將具有專一性的抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

  2. 加入待測檢體,檢體中若含有待測的抗原,則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

  3. 洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原專一的一次抗體,與待測抗原進行鍵結

  4. 洗去多余未鍵結一次抗體,加入帶有酶的二次抗體,與一次抗體鍵結

  5. 洗去多余未鍵結二次抗體,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結果

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