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色氨酸羥化酶(Th)ELISA 試劑盒

簡要描述:色氨酸羥化酶(Th)ELISA 試劑盒 Tryptophan hydroxylase Assay Kit!本公司長期經營代理試劑盒,價格實惠,質量保證,價格請咨詢在線人員。

  • 產品型號:Th
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2018-07-04
  • 訪  問  量:295

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色氨酸羥化酶(Th)ELISA 試劑盒

夾心法

夾心法常用于檢測大分子抗原,一般的操作步驟為:

  1. 將具有專一性的抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

  2. 加入待測檢體,檢體中若含有待測的抗原,則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

  3. 洗去多余待測檢體,加入另一種對抗原專一的一次抗體,與待測抗原進行鍵結

  4. 洗去多余未鍵結一次抗體,加入帶有酶的二次抗體,與一次抗體鍵結

  5. 洗去多余未鍵結二次抗體,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結果

色氨酸羥化酶(Th)ELISA 試劑盒

用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產物易于顯現;能商品化生產。當前應用較多的有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應用廣。

過氧化物酶廣泛分布于植物中,辣根中含量高,從辣根中提取的稱辣根過氧化物酶(HRP),是由無色酶蛋白和深棕色的鐵卟啉構成的一種糖蛋白(含糖量18%),分子量約40 000,約由300個氨基酸組成,等電點為pH 3-9,催化反應的適pH值因供氫體不同而稍有差異,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%飽和度以下的硫酸銨溶液。酶蛋白和輔基的大吸收光譜分別為275nm和403nm。

酶的純度以RZ表示:RZ=OD403/OD275

純酶的RZ多在3.0以上,高為3.4。RZ在0.6以下的酶制品為粗酶,非酶蛋白約占 75%,不能用于標記。RZ在2.5以上者方可用于標記。HRP的作用底物為過氧化氫,催化反應時的供氫體有幾種:(1)鄰苯二胺(OPD),產物為橙色,可溶性,敏感性高,大吸收值在490nm,可用肉眼觀察判別,容易被濃H2SO4終止反應,顏色可在數小時內不改變,是目前國內ELISA中常用的一種;(2)聯大茴香胺(OD),產物為橘黃色,大吸收值在400nm,顏色較穩定;(3)5-氨基水楊酸(5-AS):產物為深棕色,大吸收值在449nm,部分溶解,敏感性較差;(4)鄰聯甲苯胺(OT)產物為藍色,大吸收值在630nm,部分溶解,不穩定,不耐酸,但反應快,顏色明顯。

工作原理

本試劑盒采用雙位點夾心酶聯免疫吸附法(ELISA),測定樣品中的水平。向預先包被抗體的酶標孔中加入標準品、待測樣本和HRP標記的抗體,經過溫育和洗滌,去除未結合的組分,然后再加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中的濃度呈正相關。

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